Una domanda congiunta fornisce una breve descrizione della procedura per lisare e di come eliminare i globuli rossi dai campioni di flusso citometrico.

Una domanda congiunta fornisce una breve descrizione della procedura per lisare e di come eliminare i globuli rossi dai campioni di flusso citometrico.

“https://www.news-medical.net/whitepaper/20190502/The-Functions-of-Radial-Glia-Cell-Markers.aspx”,”200″,”OK”, “Contenuto sponsorizzato entro il 2 maggio 2019

Questa è una domanda sul seguito del marker del radiale che è ampiamente utilizzato.

Durante la neurogenesi, è una trasformazione della cellula neuroepiteliale (NE) in. Il carattere del poi le giunzioni tende a dormire sottoregolate per favorire le giunzioni adhesenti. Cominciano ad emergere la caratterizzazione gliale, comprendente il marker degli astrociti e il carattere morfologico con glicogeno granuli.

Vimentin

La vimentina è una proteina del filamento intermedio che si esprime durante la transizione tra la cellula e la cellula a NE di tutto il radiale e continua fino a tutto l’astrocita

Sezioni di tessuto cerebrale di scimmia Rhesus colorate with anti-vimentin (ab92547).

Inibitore della vimentina e agente antiangiogenico: Withaferin A (dal 120644).

PAX 6

È una questione di trascrizione che favorisce la neurgenesi.

Sezioni cerebrali embrionali di topo (E12.5) colorate con anti-PAX6 (ab5790).

HES1 e HES5

Fattori di transcrizione che regolano il maintenance di.

Sessione del cervello della sommità colorata con anti-HES5 (rosso) (ab25374).

Marcatori astrocitici: GFAP, GLAST e BLBP

Ho chiesto i marcatori astrocitari emergono quando le cellule neuroepitheliali diventano glia radiali.

Anti-BLBP colorato anti-BLBP (ab32423).

Downregulator dell’espressione di GFAP: metilprednisolone (dal 142007).

Molecole di adesione e matrice extracellulare: TN-C e N-caderina

La sovraregolazione dell’adesione e la proteina della matrice extracellulare accompagnano la trasformazione della cellula NE in glia radiali.

Sezione corticale coronale embrionale di topo colorata con antiaderente (rosso) (ab76011).

Nestin

Una proteina filamentosa intermedia, la pressione rimane buona per tutto l’astrocita.

Sezioni di tessuto cerebrale adult di ratto colorate with anti-nestin (ab6142).

SOX2

SOX2 è un fattore di trascrizione e il primo marker del piastrone neurale. Ett spettacolo nelle cellule proliferanti e in quelle che acquisiscono destini gliali, ma sottoregolato nei neuroni post-mitotici.

Sezioni di tessuto cerebrale embrionale di pollo (E7) colorate con anti-SOX2 (ab97959).

Riferimenti e ulteriori letture

  • Bargagna-Mohan, P. et al. Il tumore inibitorio e agente antiangiogenico con ferina Attenzione alla proteina del filamento intermedio vimentina. Chem.Biol.14, 623-34 (2007).
  • Bylund, M., Andersson, E., Novitch, B.G. Muhr, J. La neurogenesi dei vertebrati è il contrasto tra tutti i Sox1-3. Nat Neurosci 6: 1162-1168 (2003).
  • Heins, N. et al. Le cellule gliali generano neuroni: the ruolo del fattore di trascrizione Pax6. Nat. Neurosci. 5, 308-315 (2002).
  • Kageyama, R., Ohtsuka, T. Kobayashi, T.Ruoli dei geni Hes nello sviluppo neurale. Crescita dello sviluppo e differenziazione 50, (2008).
  • Kriegstein, A. Alvarez-Buylla, A. La natura gliale delle cellule staminali neurali embrionali e adulte. Annu. Rev. Neurosci. 32: 149-84 (2009).
  • Kriegstein, A. R. Götz, M. Radial glia diversità: una questione di destino della cellula. Glia 43: 37-43 (2003).
  • Kriegstein, A. Alvarez-Buylla, A. La natura gliale delle cellule staminali neurali embrionali e adulte. Annu. Rev. Neurosci. 32: 149-84 (2009).
  • Lamouille, S., Xu, J. Derynck, R. Meccanismi molecularolari della transizione epiteliale-mesenchimale. Nat. Rev. Mol.Cell Biol.15, 178-96 (2014).
  • Liu, W.-L. et al. Il metilprednisolone se inibisce la proteina acida fibrillare gliale e ha dato ai proteoglicani condroitina solfato negli astrociti riattivati. Glia 56: 1390-400 (2008).
  • Papanayotou, C. et al. Un meccanismo che controlla la pressione del Sox2 nella parete neurale embrionale. Plos Biol 6, e2 (2008).

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Lo scopo di Abcam

Si tratta di un archivio globale della scienza che fornisce anticorpi altamente validati e altri leganti e comunità clinica per ulteriori progressi nella comprensione della biologia e delle sue cause.

La missione di Abcam servirà come scienziati della vita per aiutarli a raggiungere più rapidamente la missione del pappagallo, rivelando il design unico del pappagallo, innovando e migrando continuamente e utilizzando pappagallo gli strumenti, i dati e l’esperienza che desidera. L’ambiente di Abcam è diventare l’azienda di scienze della vita più influente per i ricercatori di tutto il mondo.

Sui contenuti sponsorizzati policy: News-Medical.net pubblica articoli e contenuti correlati che possono essere derivati ​​dalle fonti in cui rapporti commerciali esistenti, una condizione che tali contenuti aggiungano valore all’etica editoriale di base di News-Medical.Net che è quello di educare y inform the visitatori site of interest to ricerca medica, scienza, dispositivi medici e trattamenti.

“https://www.news-medical.net/whitepaper/20190205/An-Overview-of-the-Protocol-for-Red-Cell-Lysis.aspx”,”200″,”OK”, “Contenuti sponsorizzati di 5 febbraio 2019

La domanda articolo fornisce una breve descrizione della procedura per lisare e chi eliminerà globuli rossi dai campioni di flusso citometrico. La citometria a flussione è una tecnica comune utilizzata per una varietà di tipi di antigeni e proteine, in particolare per l’immunofenotipizzazione. È molto più probabile che i risultati siano accurati e possano essere analizzati con maggiore facilá se i globuli rossi all’interno del campione sono stati lisati.

Soluzioni

La soluzione utilizzata in questa procedura include:

Soluzione Triton X-100: Triton X-100 tutto 0,12% solo in preparazione in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)

Tampone tampone: 4% di siero bovino fetale o 2% di albumina di siero bovino in PBS.

Metanolo: una soluzione di madre di metanolo al 50% preparata in PBS e conservata a -20 ºC.

Procedura

Ho seguito lo schema:

  1. ۶۵ µl di formaldeide al 10% e 100 µl di sangue per una concentrazione finale di formaldeide al 4%.
  2. Domanda: incubare a temperatura ambiente per dieci minuti.
  3. Aggiungere 1 mL della soluzione Triton X-100 per una concentrazione finale dello 0,1%.
  4. Formaggio problema, incubare nuovamente a temperatura ambiente per 30 minuti.
  5. Aggiungere 1 ml del tampone di lavaggio all’acqua.
  6. Il campione viene messo in centrifuga e centrifuga, premio di questo risospeso in 1 mL di MeOH al 50%.
  7. Il sospetto viene ora incubato a 4ºC per 10 minuti più.

Il kit per la lista Rossi Globes è disponibile nei negozi, ma è necessario prestare attenzione alle istruzioni del prodotto.

Ricerca

Diversi ricercatori hanno scritto sugli effetti dei detergenti sulla visualizzazione di antigeni sui globuli rossi, sia superficiali che intracellulari. Il relatore successivo si occupa del modo in cui vari il detersivo, la diversa concentrazione del detersivo, l’influenza di esso e il rischio del sangue interno, il valore dell’analisi della dispersione della luce.

Questo numero è valido solo per detersivi in ​​misura racconto da producción a significative livelihood of danno ai rossi globuli dopo essere stati fissati con il 2% di formaldeide per dieci minuti at ambient temperature, valid per Triton X 100, NP-40 Brij-58. Hanno ha visto un impatto negativo sulla diffusione del sangue dalla cellula sanguigna interna, un ceppo sulla concentrazione del superate dello 0,2%. Per tutto questo tempo, la concentrazione è stata dello 0,1% e il globuli rossi non è stato completamente stabile. La condizione originale determinata dall’incubatore con il detergente allo 0,1% per 30 minuti.

Adattato fornisce:

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“https://www.news-medical.net/whitepaper/20190429/Resources-for-Calcium-Signaling.aspx”,”200″,”OK”, “Contenuto sponsorizzato entro il 29 aprile 2019

Varia a seconda del tipo di cellula e del processo cellulare, come il sistema nervoso, il muscolo cardiaco, l’apoptosi e la condizione neoplastica.

La segnalazione all’interno del sistema nervoso tratta il calcio

All’interno delle cellule nervose, il calcio agisce sia mangia portatore di carica che emes secondo messaggero all’interno della cellula. Se c’è una migrazione della cellula nervosa, tutte le dinamiche del cono di crescita, c’è la ramificazione della sciropposi e tutta la sinergia del neurone. Questa è una cosa ovvia nel cambiare il processo cellulare separatamente, come parte della diversità per tutti.

Segnalazione del calcio nei miociti cardiaci

Vieni con l’elettromeccanica cruciale collegiale mangia la seconda elettrificazione utilizzando il muscolo cardiaco e meccanismo contrattile, contro il muscolo cardiaco e consenti l’afflusso di sangue. Cintura larga larga con un imbuto sulla cellula della pelle, comprime il motivo incrociato.

Segnalazione del calcio e apoptosi

L’apoptosi è un meccanismo di morte cellulare e il mio processo è strettamente regolato. È una parte estremamente necessaria dello sviluppo e della struttura del corpo. Non mi accorgo nemmeno che le piccole nella concentrazione di calcio modificano l’apoptosi e la provocano.

Targeting contro il cancro

Quando un controllo viene perso nel controllo dell’organismo, causerà il funzionamento dell’organismo, causando il cambiamento neoplastico. In effetti, si tratta di contrarre il persiano per stabilire individualmente la caratteristica distintiva del cancro.

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“https://www.news-medical.net/whitepaper/20190522/Imaging-Calcium-in-Motor-Neurons-Using-Fura-2-AM.aspx”,”200″,”OK”, “Contenuti sponsorizzati di 22 maggio 2019

Questa articolazione presenta una tecnica precisamente descritta con la stessa suggestione di successo nel successo del calcio e dei suoi motoneuroni spinali ventrali del midollo spinale.

۱٫ Predisposizione per la raccolta dei motoneuroni, al centro della spina ventrale dell’apice dei 13 giorni, da parte della cellula aderente all’intera collezione

Il primo passo è la centrifugazione dei nervi motori e della cellula motoria, è un cugino OptiPrep al 6,2%.

Quindi le cellule gliali sono state piastrate your poly-L-ornithine (1 mg / mL in borate buffer) to prepare gli strati di alimentazione gliale, using 12 mm piatti rivestiti from Marienfeld GmbH Co. KG, Germany. La densità utilizzata era di 50.000 cellules / piatto e il terreno utilizzato era il terreno F12 di DMEM / Ham, con la condizione integrale del feto (10%) nel corso della prima settimana, ma successivamente sostituito con la serie cavallo (10%) e penicillina (10 U / mL) / streptomicina (10 μg / mL).

La frittura artritica in un motoneuroni è la stessa dell’impiantata, with a semi on strati di alimentazione gliali già preparati, ad a densità di 30,000 cellule / piatto. Adesso dormono stati effettuati gli espeimenti di imaging del calcio.

La temperatura per la quale è stata mantenuta la temperatura era di 37 ° C, in un umidificatore incubatore con 5% di CO. Gli espeimenti sono stati iniziati il ​​giorno 13 della vita in vitro della coltura.

۲٫ Sciogliere Fura2-AM

In quella fase, l’ho visto entrare direttamente, utilizzando DMSO per una concentrazione finale di 2 mM. Proteggi la tua soluzione coprendola con un fuoco in alluminio. Preparare un’aliquota da 2 µl e aggiungere la miscela. Ho avuto questo che volumi più piccoli sbiancheranno più velocemente.

۳٫ Aggiungi Fura-2 AM alle do cellule

Ora, 2 µl dell’aliquota Fura-2 AM del 500 µl sciolte in ogni pozzetto per una concentrazione finale di 8 µM. Ciò è stato ottenuto aggiungendo Fura-2 AM direttamente al campo di raccolta contenente motoneuroni, che viene prodotto utilizzando mezzo neurobasale, neuromix B27 (2%), integratore di azoto (0,2%), L-glutammina (1 mM), serie di cavallo (2%), penicillina (10 U / mL) / streptomicina (10 μg / mL) e BDNF (2 ng / mL).

L’aliquota deve essere pre-rischiata (utilizzando solo le calorie delle mani) secondo un corretto scioglimento. Altrimenti, piccoli aggregati di colorante saranno visti mangiare macchie luminose durante l’imaging.

۴٫ Incubare

Rimettere le cellule nell’incubatore, incubare per 20 minuti.

۵٫ Rimuovere il vetrino coprioggetto e trasferirlo senza impostazioni di imaging

Conservare l’olio in una capsula di Petri contenente una soluzione extracellulare standard (in mM) HEPES 11.6, NaCl 129.1, KCl 5.9, glycoside 11.5, MgCl 1.2, CaCl 3.2 e aggiustare a pH 7.4 con NaOH. (Lava issue già il coprioggetto.). È importante assicurarsi che la soluzione sia sana preriscaldate.

۶٫ Celle immagine

Adesso il video va inserito nella fotocamera dell’immagine che di solito c’è quella che è la soluzione extracellulare in esecuzione.

La cella utilizza una precisione alternativa di 350 nm e 380 nm a 5 ms dalla posizione e la cella viene fornita con un filtro LP 440.

Adesso le cellule gliali ci ha si mostrano regolari spontanee.

Il motoneurone non ha mostrato spontaneità calcica transitoria, solo quando neuronale ritirato suonava molto denso.

I motoneuroni non hanno mostrano alias stimolazione transitoria del calcio con kainato, agonista del recettore AMPA.

Riferiment

Il problema di Protocollo è stato gentilmente presentato dal Dr Janin Lautenschläger (Lautenschläger et al. Exper Neurol 2013, PMID: 23578819).

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Il monomero e l’aggregato glicico della proteina alfa-sinucleina non inducono facilmente la patologia del corpo del neurone di Lewy.